中医研究２０１８年３月 第３１卷第３期ＴＣＭ Ｂｅｓ．Ｍａｒｃｈ ２０１８ Ｖｏ１．３Ｉ Ｎｏ．３ ·７５· ２０１０。２３（５）：７８３—７９２． ［１４］海春旭．自由基医学［Ｍ］．西安：第四军医大学出版 社。２００６． ［８］武欣迎，陈镜楼．渐尖毛蕨总黄酮通过ｍｉＲ一２９／ＴＧＦ— ｐｌ慢性镉暴露诱导的大鼠肾脏损伤［Ｊ］．中药材， ２０１６，３９（８）：１８７９—１８８２． ［１５］ＬＵＥＶＡＮＯ Ｊ，ＤＡＭＯＤＡＲＡＮ Ｃ．Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｅｎｔｓ ｏｆ ｃａｄｍｉｕｍ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｐａｔｈｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２０１４，３３（３）：ｌ８３—１９４． ［９］姜丽莹，何剑斌，郑伟萍，等．莱菔硫烷对染镉小鼠睾丸间 质细胞抗氧化功能影响的研究［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１７， ４４（２）：５６８—５７７． ［１６］吴仕漩，朱盼，赵敏，等．Ｌ一谷氨酰胺在镉致ＨＫ一２细 胞损伤中的作用初探［Ｊ］．毒理学杂志，２０１６，３０（２）： １ｌ３一ｌ１７． ［１Ｏ］王乐乐，刘江正，刘萌萌，等．镉暴露致大鼠肾损伤的量 效关系及其机制［Ｊ］．癌变·畸变·突变，２０１６，２８（６）： ４４６—４５２． 作者简介 雍文兴（１９７３一），男（汉族），甘肃榆中人，副主任医师， ［１ １］ＪＯＲＧＥ－ＮＥＢＥＲＴ ＬＦ，ＧＡＬＶＥＺ－ＰＥＲＡＬＴＡ Ｍ。ＬＡＮＤＥＲＯ 学士，主要从事中西医结合急危重医学研究。 ＦＩＧＵＥＲＯＡ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ｃａｄ－ 通信作者：颜春鲁，副教授，甘肃中医药大学教学实验实训中 ｍｉｕｍ ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ：ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｖｅｒｓｕｓ ｏｒａｌ Ｃｄ－ｔｒｅａ－ 心，甘肃省兰州市城关区定西东路３５号，７３００００，ｙａｎｃｈｌ１９７９ ｔｅｄ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ａｎｄ ＺＩＰ１４ ｋｎｏｃｋｏｕｔ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｓｃｉ， ＠１２６．ｃｏｒｎ ２０１４，１４３（１）：２６—３５． ｝基金项目：甘肃省自然科学基金项目（１５０８ＲＪＺＡ０４６）；甘 ［１２］ＭＡＴＯＶＩＣ Ｖ，ＢＵＨＡ Ａ，ＢＵＬＡＴ ｚ，ｅｔ ａ１．Ｃａｄｍｉｕｍ ｔｏｘｉｃｉｔｙ 肃中医药大学中青年基金项目（ＺＱ２０１４—９）；敦煌医学与转 ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ：ｆｏｃｕｓ ｏｎ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ 化省部共建教育部重点实验室开放基金项目（ＤＨＹＸ１２１３— ｗｉｔｈ ｚｉｎｃ ａｎｄ ｍａｇｎｅｓｉｕｍ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｔｏｘｉｃｏｌ，２０１１，６２（１）： ００４）；甘肃中医药大学教学研究与教学改革项目（ＺＨ一 ６５—７５． ２０１６０６）；甘肃中医药大学大学生创新基金项目 ［１３］ＷＡＮＧ Ｊ，ＺｈＵ Ｈ，ＬＩＵ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｎ－ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ａｇａｉｎｓｔ 收稿日期：２０１７—０６—１９；修回日期：２０１８—０ｌ一２３ ｃａｄｍｉｕｎｌ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｕ＇ｅｓｓ ｉｎ ｒａｔ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｅｔ （编辑 陶 珠） Ｓｃｉ，２０１４，１５（４）：４８５． 文章编号：１００１—６９１０（２０１８）０３—００７５—０３ ·实验研究· 枸杞多糖对ＩＩ型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用 王爱青 ，何 媛 （１．洛阳市食品药品检验所，河南洛阳４７１０２３；２．郑州大学，河南郑州４５０００１） 摘要 目的：观察枸杞多糖对ＩＩ型糖尿病大鼠非酒精性脂 多糖可降低大鼠血清中ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ、ＴＣ、ＦＢＧ和ＦＦＡ水 肪肝的干预作用。方法：取５８只６周龄纯系雄性Ｗｉｓｔａｒ大 平，改善ＩＩ型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝病变。 鼠，随机选取ｌＯ只作为空白对照组，给予常规饲料喂养；剩 关键词枸杞多糖／药效学；ＩＩ型糖尿病；非酒精性脂肪肝／ 余大鼠采用高糖高脂饮食与腹腔注射小剂量链脲佐菌素建 治疗；动物；大鼠 立ＩＩ型糖尿病大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型对照组 中图分类号：Ｒ５７５．５ 文献标志码：Ｂ 和构杞多糖高、中、低剂量组，每组ｌＯ只。枸杞多糖高、中、 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１—６９１０．２０１８．０３．２９ 低剂量组分别给予构杞多糖３００，１５０，７５ ｇ／ｇ灌胃，正常对 照组和模型对照组给予等体积生理盐水，ｌ ｄ ２次，持续 糖尿病是非酒精性脂肪肝发生的危险因 ｌ４周。每周称量体质量１次，并随体质量调整给药剂量。 素。ＩＩ型糖尿病患者糖、脂代谢紊乱，血液中游离脂 灌胃结束后的第２天称量大鼠体质量，空腹于尾静脉取血； 肪酸含量增加，从而引起肝脏内三酰甘油增多，造成 摘除肝脏并称量质量，计算肝重指数；采用全自动生化分析 肝脏代谢紊乱，形成非酒精性脂肪肝。临床研 仪测定血清丙氨酸转移酶（ＡＬＴ）、天冬氨酸转移酶（ＡＳＴ）、 究 表明：Ⅱ型糖尿病与肝脏脂代谢紊乱有密切 血清三酰甘油（ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、空腹血糖（ＦＢＧ）及游 关系，糖尿病患者中非酒精性脂肪肝的患病率近半。 离脂肪酸（ＦＦＡ）；制作肝脏病理切片，光镜下进行组织病理 因此，寻找治疗Ⅱ型糖尿病患者非酒精性脂肪肝具 学观察。结果：与正常对照组对比，模型对照组大鼠肝重指 有重要的临床意义。枸杞是茄科植物，花紫、果红， 数、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ、ＴＣ、ＦＢＧ和ＦＦＡ水平均升高，差别均有统 计学意义（Ｐ＜０．０１）。与模型对照组对比，拘杞多糖中剂量 其果实枸杞子是我国传统的名贵中药材，具有滋肾 组、高剂量组大鼠体质量升高，构杞多糖中剂量组、高剂量组 补髓、养肝明目的功效。现代医学认为其可以调节 大鼠ＴＣ水平下降，构杞多糖各剂量组大鼠肝湿重、肝重指 机体免疫力、抑制肿瘤生长和细胞突变、延缓衰老及 数、ＦＢＧ、ＦＦＡ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ水平降低，差别有统计学意义 抗脂肪肝等药理作用 。枸杞多糖作为枸杞子的 （Ｐ＜０．０５。Ｐ＜０．Ｏ１），肝脏病变程度有所改善。结论：枸杞 主要活性成分之一，具有增强免疫力、抗癌、抗衰老、 ·７６· 中医研究２０１８年３月 第３１卷 第３期ＴＣＭ Ｒｅｓ．Ｍａｒｃｈ ２０１８ Ｖｏ１．３１ Ｎｏ．３ 保护视神经、防止细胞凋亡等作用 。本实验研究 了枸杞多糖对ＩＩ型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的 干预作用，以期为临床用药提供理论依据。 １材料与方法 １．１ 动 物 血糖。以空腹血糖值＞１１．１ ｍｍｏｌ／Ｌ确定为ＩＩ型糖 尿病模型 。将造模成功的大鼠随机分为模型对 照组、枸杞多糖高剂量组、枸杞多糖中剂量组与枸杞 多糖低剂量组，每组ｌ０只，并持续给予高脂饲料至 实验结束。枸杞多糖高、中、低剂量组分别给予枸杞 多糖混悬液３００，１５０，７５ Ｉ￣ｇ／ｇ灌胃，正常对照组和 模型对照组给予等体积生理盐水，１ ｄ ２次，持续 ｌ４周。每周称量体质量１次，并随体质量调整给药 剂量。 １．４检测指标 ６周龄纯系雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５８只，体质量 １４０—１６０ ｇ，清洁级，购自河南省实验动物中心，许 可证号：ＳＣＸＫ（豫）２０１６—００２４。 １．２ 药品、试剂与仪器 枸杞子，购自安徽省毫州市药材总公司中药公司。 枸杞多糖，自制，方法如下：精密称取枸杞３ ０００ ｇ，料液 比１：３５，温度９０℃，ｐＨ值１１，浸提３ ｈ，提取２次， 合并提取液，加３倍体积９５０ ｍＬ／Ｌ乙醇沉淀６ ｈ时， Ｓｅｖａｇｅ法和ＤＡＴＥ一纤维素法纯化，浓缩干燥，检测 纯度为６８．６％。使用时以无菌生理盐水配置为混 悬液。链脲佐菌素（ＳＴＺ），美国Ｓｉｇｍａ公司产品，批 号８００８１９３４７３；总胆固醇（ＴＣ）试剂盒，深圳市宝安 康生物技术有限公司产品，批号１７０４０２；３ ｇ／Ｌ胆酸 钠及胆固醇，郑州利伟生物实业有限公司产品，批号 １７０５０４。５４２４Ｒ型低温高速离心机，德国艾本德股 份公司产品；ＵＶ一１６００型紫外可见分光光度计，上 海美谱达仪器有限公司产品；ＩＮＦＯＲＳ全自动生化 分析仪，北京桑翌实验仪器研究所产品。 １．３ 动物分组、模型的建立与给药 灌胃结束后的第２天称量大鼠体质量，空腹于 尾静脉取血；摘除肝脏并称量质量，计算肝重指数； 制作肝脏病理切片，光镜下进行组织病理学观察。 采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转移酶 （ＡＬＴ）、天冬氨酸转移酶（ＡＳＴ）、血清三酰甘油 （ＴＧ）、总胆固醇（ＴＣ）、空腹血糖（ＦＢＧ）及游离脂肪 酸（ＦＦＡ）。 １．５统计学方法 采用ＳＰＳＳ １８．０统计分析软件处理。数据以均 数（ ）±标准差（ｓ）表示，组间比较采用ｔ检验。检 验水准 ＝０．０５。 ２ 结 果 ２．１ 各组大鼠体质量、肝湿重与肝重指数对比 与模型对照组对比，枸杞多糖中剂量组、高剂量 随机选出１Ｏ只大鼠为正常对照组，给予常规饲 组大鼠体质量升高，枸杞多糖各剂量组大鼠肝湿重 与肝重指数降低，差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５或 Ｐ＜０．０１）。见表１。 ± 料喂养；其余４８只大鼠给予高脂饲料喂养，４周后， 给药ＳＴＺ（３５ Ｉ￣ｇ／ｇ）一次性腹腔注射，３ ｄ后测空腹 表１ 各组大鼠体质量、肝湿重与肝重指数对比 注：与模型对照组对比，·Ｐ＜０．０５，｝＋Ｐ＜０．Ｏｌ ２．２各组大鼠ＦＢＧ、ＦＦＡ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ和ＴＣ水平 对比 与模型对照组对比，枸杞多糖各剂量组大鼠 ＦＢＧ、ＦＦＡ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ水平下降，枸杞多糖中剂量 组、高剂量组大鼠ＴＣ水平下降，差别有统计学意义 （Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。见表２。 ｎ＝１０，ｉ±ｓ 表２各组大鼠ＦＢＧ、ＦＦＡ、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ和ＴＣ水平对比 压：与梗玺对ＪＩｆｌ组对比．·尸‘０．０５．··尸‘０．Ｏ１ ２．３ 各组大鼠肝脏组织病理变化 高度气球样变，呈现以大泡性为主的脂肪性变化，为 重度脂肪肝改变。枸杞多糖各剂量组大鼠肝细胞索 模糊，肝窦狭窄，肝细胞内脂滴减少，以大、小泡性混 杂，为中度脂肪肝改变。见图１。 正常对照组：肝小叶结构正常，肝细胞形态饱 满，大小均匀一致，肝细胞分界清析并以静脉为 中心向四周呈放射状整齐排列。模型对照组：肝小 叶结构明显紊乱，肝细胞索模糊，肝窦消失，肝细胞 中 研究 ２０Ｉ ８年３月 第３１卷 第３期ＴＣＭ Ｒｅｓ．Ｍａｒｃｈ ２０１８ Ｖｏ１．３Ｉ Ｎｏ ３ ７７· Ａ．正常对照组；Ｂ．模型刘’．｝！｛｛组； Ｃ．卡幻杞多糖高剂 绀； 恂杞多糖ｌ｝１剂｛ｌ｛＝绀； Ｅ．佝杞多糖低剂艟组 图Ｉ 锌组大鼠肝脏组织病理学变化（ＨＥ染色，×２００） ３ 讨 论 糖、脂代谢紊乱在Ⅱ型糖尿病非酒精性脂肪肝 的发生、发展中发挥着重要作用，但『大Ｉ治疗时程较 长，严重影响着患者的生活质量和健康状况 。枸 杞子的药理和保健作片Ｊ与枸杞多糖的含量有很大关 系。枸杞多糖是枸杞子中重要的活性成分之一，具 有抗氧化、抗衰老、提高免疫力、抗肿瘤、保肝、降血 压、降血糖、降ｍ【脂等多种功能，且无任何毒副作 用 。马艺鑫等 研究揭示：枸杞多糖对由于雌激 素降低而引起的脂代谢紊乱有改善作用；但针对其 对ＩＩ型糖尿病大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用研 究较少。因此，枸杞多糖降糖作用的相关机制有待 进一步研究。 本实验参考相关文献 ，通过高脂饮食与小剂 量ＳＴＺ建立了ＩＩ捌糖尿病非酒精性脂肪肝的大鼠 模型，与正常对照组埘比，模型对照组大鼠体质量降 低，肝重指数 ‘高，且ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＧ、ＴＣ、ＦＢＧ和 ＦＦＡ水平均有所升高，且差别有统计‘学意义（Ｐ＜ ０．０１）。枸杞多糖高、中、低剂量组大鼠经灌胃枸杞 多糖混悬液１４周，体质量升高，肝功能好转，血糖、 脂水平降低；肝细胞病理组织学表现改善。结果 表明：枸杞多糖可改善肝脏脂质代谢，减缓大鼠ＩＩ 型糖尿病非酒精性脂肪肝的病变，但其机制有待进 一步研究。 ４ 参考文献 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