实验二 经口急性毒性试验

一、实验目的

1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术

二、试剂和材料

1、实验动物：

（1）动物品种：健康成年ICR小鼠，体重18g～22g （2）样品来源：首都医科大学实验动物部

2、器材：注射器（1ml）、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。

3、试剂：敌敌畏（1400mg/ml）、苦味酸染液（标记用）。

三、实验内容

1、健康实验动物的选择和性别鉴定

选择健康的雄性小鼠（健康标准：毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎，废弃。）

肛门与生殖孔距离：大者为雄性，小者为雌性

2、实验动物称重、编号和随机分组

选择体重在18-22 g的小鼠，采用随机分组的方法（动物按体重分为几个体重段，再从每个体重段分出各组动物），每组10只小鼠，用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。

3、受试化学物溶液的配制 （1）确定灌胃量：0.1ml/10g

（2）确定最高给药量，计算溶液浓度，估计给药总体积 （3）药品称量及稀释

4、小鼠灌胃技术

左手固定，右手持灌胃器，插入动物口腔，沿咽后壁徐徐插入食道，深度为口腔至剑突的距离。

5、毒性体征的观察和LD50计算 （1）毒性体征的观察：

染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间

按表格记录动物体征及出现时间，记录死亡情况及时间，观察期为30 min

（2）LD50的计算：

a、实验各组剂量的确定：设5组，每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为：

dlgLD100lgLD0组数1 d为相邻两个剂量组剂量对数之差

利用lgLD0依次加d，取反对数，即可得出各组剂量。

b、LD50的计算（见附件）：

1lgLD50Xkd(PiPi1)2Xk:最大剂量的对数 d ： 相邻两组对数剂量之差数Pi： 各组死亡率i ： 组数C、求半数致死量的95%可信区间

标准误公式：

Pi(1Pi)SlgLD50d ni1

ni:实验动物数。

95%可信区间：lg-1(lgLD501.96SlgLD50)

四、实验过程

1、人员分工：本次实习同学分两个大组(A组和B组)，分别在不同实验室。每大组分5个小组，分别处理雌雄动物，每小组10只动物。

集体活动：1、 2、 3、 4、5 组各1人，进行受试物配制。

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各小组活动：

每小组1人（共4人），进行动物标记。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行体重记录。（1-10号） 每小组1人（共4人），进行灌胃。（1-10号）

每小组1人（共4人），根据体重吸取受试物（0.1ml/10g）

五、剂量设计及受试物配制表

见附件

六、实验结果

1、急性经口毒性试验原始记录（见附件） 2 、LD50计算表（见附件）

3、结果计算（按照ppt中所给的剂量设计及受试物配制表计算）

lgLD100lgLD0 d=(lg500-lg100)÷4=（0.6990-2）÷4=0.1747 组数1

Pi(1Pi) 0.62SlgLD50d=0.1747× =0.0316 ni120-11lgLD50Xkd(PiPi1)

2=2.1747-1/2×（（0+0.35）+（0.35+0.2）+

（0.2+0.65）+（0.65+1））

=1.8777

95%可信区间：lg-1(lgLD501.96SlgLD50)

95%可信区间：lg-1(1.87771.96× 0.0316)

即：65.4335~87.0162mg/Kg

七、实验结论与分析

1、毒性物质敌敌畏为中等毒性，体重在18~22g之间的雄性健康成年ICR小鼠（来源于首都医科大学实验动物部）经口急性染毒的LD50为65.4335~87.0162mg/Kg。 2、毒性特征：小鼠在经口染毒后短时间内出现抽搐，躁动不安，麻痹，肌张力松弛，反应减弱，同时伴有呼吸加快，口吐白沫，鼻孔溢液，尿失禁，腹泻等症状，然后在10分钟左右死亡。

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3、本组小鼠为径口染毒的最低剂量，没有出现死亡小鼠，观察过程中，6号小鼠出现亢奋，8号小鼠出现腹泻症状。

4、经过上述症状，可以看出敌敌畏急性毒性包括中枢神经系统与躯体感觉和运动系统毒性，呼吸系统毒性，消化系统毒性，泌尿毒性。

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