自制捕获法ELISA抗麻疹病毒-IgM诊断试剂盒的初步评价

・２７８・　世界感染杂志２００７年第７卷第４期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎＶｏｌｕｍｅ　７，Ｎｕｍｂｅｒ４，Ａｕｇ　２００７　文章编号：１５６２．３１２２（２００７）０４—０２７８—０３　术论著术　自制捕获法ＥＬＩＳＡ抗麻疹病毒一ＩｇＭ诊断试剂盒的　初步评价　周志统，陈娟娟，朱黎华，蒋伟伦　摘要：目的初步评价应用自制抗麻疹病毒（抗ＭＶ）单克隆抗体（ＭｃＡＢ；单抗）及其酶结合物研制　的捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ诊断试剂盒。方法考核本试剂盒的特异性和稳定性；比较其与同类商品　试剂盒的临床检测结果，以评估检测血清抗ＭＶ—ＩｇＭ的敏感性。结果　①本试剂盒仅与抗ＭＶ—ＩｇＭ阳　性血清发生反应，而与抗甲型肝炎病毒一ＩｇＭ（抗ＨＡＶ—ＩｇＭ）、抗乙型脑炎病毒一ＩｇＭ（抗ＪＥＶ—ＩｇＭ）、　抗乙型肝炎病毒核心一ＩｇＭ（抗ＨＢｃ—ＩｇＭ）、抗巨细胞病毒一ＩｇＭ（抗ＣＭＶ—ＩｇＭ）、抗ＥＢ病毒一ＩｇＭ（抗　ＥＢＶ．ＩｇＭ）及类风湿因子（ＲＦ）阳性血清均无反应；试剂盒放置３７￣Ｃ　３ｄ，检测血清抗ＭＶ—ＩｇＭ的活　性，无明显降低。②在３９例临床疑似麻疹的５６份血清中，两种试剂盒仅对８例的８份血清抗ＭＶ—ＩｇＭ　检测结果不一致，其中６例的首份血清，本试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（第２份血清两种试剂盒均　阳性），１例的首份血清（未采到第２份血清），本试剂盒为临界值，商品试剂盒阴性　另１例的第２　份血清本室试剂盒阳性，商品试剂盒阴性（两种试剂盒首份血清均阴性，第３份血清均阳性）。结论本　实验室研制的捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性，适于麻疹病　毒感染的临床诊断和流行病学监测。　关键词：麻疹病毒；单克隆抗体；抗麻疹病毒一ＩｇＭ；酶联免疫吸附试验　中图分类号：Ｒ５１１．１　文献标识码：Ａ　Ｔｈｅ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｌｆ－ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｃａｐｔｕｒｅ　ＥＬＩＳＡ　ａｎｔｉ－ｍｅａｓｌｅｓ　ｖｉｒｕｓ　（ＭＶ）ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＩｇＭ　ｋｉｔ　ＺＨＯＵ　Ｚｈｉ—ｔｏｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｊｕａｎｊｕａｎ，ＺＨＵ　Ｌｉ—ｈｕａ，ＪＵＡＮＧ　Ｗｅｉ—ｌｕｎ（Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ　ｔｏ　Ｆｕｄａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１５０８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ｓｅｌｆ－ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｃａｐｔｕｒｅ　ＥＬＩＳＡ　ａｎｔｉ—ｍｅａｓｌｅｓ　ｖｉｒｕｓ（ＭＶ）ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＩｇＭ　ｋｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ａｎｔｉ—ＭＶ　ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ（ＭｃＡｂ）ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ｃｏｍｐａｒｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ａｎｔｉ　ＭＶ—ＩｇＭ　ｉｎ　ｓｅｒａ　ｏｆ　ｃａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｙｐｅ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｋｉｔ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ＠Ｔｈｉｓ　ｉｋｔ　ｉｓ　ｏｎｌｙ　ａｂｌｅ　ｔｏ　ｒｅａｃｔ　ｗｉｔｈ　ｓｅｒｕｍ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ａｎｔｉ－ＭＶ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＩｇＭ　ａｎｄ　ｕｎａｂｌｅ　ｔｏ　ｒｅａｃｔ　ｗｉｔｈ　ｓｅｒｕｍ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｆｏｒ　ａｎｔｉ　ＨＡＶ—ＩｇＭ，ａｎｔｉ　ＪＥＶ—ＩｇＭ，ａｎｔｉ　ＨＢｃ—ＩｇＭ，ａｎｔｉ　ＣＭＶ—ＩｇＭ，ａｎｔｉ　ＥＢＶ—ＩｇＭ　ａｎｄ　ＲＦ；　Ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ａｎｔｉ　ＭＶ　ＩｇＭ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ｓｔｏｒｅｄ　ａｔ　３７￣Ｃ　ｆｏｒ　３　ｄａｙｓ．②Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ａｎｔｉ　ＭＶ　ＩｇＭ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ｗｅｒｅ　ｉｎｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｙｐｅ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｋｉｔ　ｉｎ　８　ｓｅｒａ　ｏｆ　８　ｃａｓｅｓ　ａｍｏｎｇ　５６　ｓｅｒａ　ｏｆ　３９　ｃａｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ　ｍｅａｓｌｅｓ．Ｉｎ　ｔｈｅｓｅ　８　ｓｅｒａ．６　ｆｉｒｓｔ　ｓｅｒａ　ｏｆ　６　ｃａｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｋｉｔ（６　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｅｒａ　ｏｆ　ｓａｍｅ　ｃａｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｙ　ｂｏｔｈ　ｋｉｔｓ）；１　ｆｉｒｓｔ　ｓｅｒｕｍ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｋｉｔ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｋｉｔ（ｎｏ　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｈｔｅ　ｓａｍｅ　ｃａｓｅ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ）；１　ｓｅｃｏｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｋｉｔ（ｆｉｒｓｔ　ｓｅｒｕｍ　ｗａｓ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｔｈｉｒｄ　ｓｅｒｕｍ　ｗａｓ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｂｙ　ｂｏｔｈ　ｋｉｔｓ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ，ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｃａｐｔｕｒｅ　ＥＬＩＳＡ　ａｎｔｉ－ＭＶ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＩｇＭ　ｋｉｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｒｅ　ｇｏｏｄ　ａｎｄ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｏｆｒ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｓ　ａｎｄ　ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｅａｓｌｅｓ　ｖｉｒｕｓ；ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　ａｎｔｉｂｏｄｙ；ａｎｔｉ—ＭＶ　ＩｇＭ；ＥＬＩＳＡ　收稿日期：２００７—０６－０８；修回日期：２００７—０７—１９　作者单位：上海市（复旦大学附属）公共卫生临床中一　病毒免疫室，上海２０１５０８　作者简介：周志统（１９５３一），男（汉族），浙江省萧山市人，副主任技师．主要研究方向：病毒免疫检验。　维普资讯 http://www.cqvip.com

世界感染杂志２００７年第７卷第４期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ　Ｖｏｌｕｍｅ　７，Ｎｕｍｂｅｒ　４，Ａｕｇ　２００７　麻疹仍是发展中国家儿童发病率和死亡率较高　的疾病，是发展中国家主要的公共卫生问题之一。　世界卫生组织（ＷＨＯ）估计２０００年全球约有超过　３　０００万病例，造成７７７　０００人死于麻疹…。许多国　家执行了麻疹疫苗接种计划，并正在努力为消灭麻　１．１．２同类商品试剂盒　同类商品试剂盒为珠海海　泰生物制药有限公司产品，批号为２００６０５０１。　１．２方法　１．２．１血清抗ＭＶ—ＩｇＭ检测　１．２．１．１　自制捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ诊断试剂盒　①病毒抗原：以上海生物制品研究所生产的ＭＶ减　毒活疫苗（上生　国药准宁Ｓ１０８２０２９３．产品批号：　２００４０１２４０３）接种Ｖｅｒｏ细胞，细胞病变达＋＋＋＋时　收获上清用作抗原。②抗ＭＶ一酶结合物：应用本室　自行研制的抗ＭＶ一单克隆抗体，标记辣根过氧化物　酶制成。③检测方法：以１：１００稀释的上述临床疑　似麻疹血清标本５０ｇＬ，加入事先包被抗ｕ链的微孔　板孔内，同批分别设置阴、阳性和空白对照孔。３７￣Ｃ　温育１ｈ，洗板，加入用ＭＶ和抗ＭＶ．酶结合物制　备的免疫复合物，各孔５０ｇＬ。３７￣Ｃ孵育１ｈ，再次　洗板，加入底物显色。再经３７￣Ｃ温育１０ｍｉｎ，加终　止液，用酶标仪读取Ａ值。结果判定：Ｓ（样品）Ａ　值／临界值（ｃｕｔｏｆｆ）≥１判为阳性。其中，临界值＝　疹病毒工作Ｌ２Ｊ。由于单靠临床诊断还不足以确诊麻　疹，实验窒诊断在根除麻疹的计划中起着非常重要　的作用。我国的麻疹实验室诊断标准　］：为①ｌｍｏ　内未接种过麻疹减毒活疫　而在血清中查到麻疹病　毒ＩｇＭ抗体：②恢复期病人血清中麻疹ＩｇＧ抗体滴　度比急性期呈４倍或４倍以上升高，或急性期抗体　阴性而恢复期抗体阳转：⑧从鼻咽部分泌物或血液　中分离到麻疹病毒，或检测到麻疹病毒核酸。但目　前用于麻疹诊断的最常用技术仍是测试疑似麻疹病　例血清标本中麻疹特异性抗体＿４　］。尤其是用捕获法　ＥＬＩＳＡ检测麻疹病毒特异ＩｇＭ。我们应用自制的抗　麻疹病毒单克隆抗体及其酶结合物，成功研制了捕　获法ＥＬＩＳＡ检测抗ＭＶ—ＩｇＭ诊断试剂盒，现初步评　价如下。　阴性对照平均Ａ值ｘ２．１（阴性对照平均Ａ值＜０．０５　时，按０．０５计算）。　１材料和方法　１．１材料　１．２．１．２　同类商品试剂的检测　同类商品试剂盒为　珠海海泰生物制药有限公司产品，检测方法按该试　用于考核的标本系２００６年　剂盒操作说明书进行。　１．２．２试剂盒特异性鉴定　自制试剂盒检测抗ＭＶ—　ＩｇＭ时，以上述抗ＨＡＶ—ＩｇＭ、抗ＪＥＶ—ＩｇＭ、抗ＨＢｃ—　１．１．１　临床血清标本本中心从３９例临床疑似麻疹病人收集的血清５６份　（９例具有双份或３份血清）；供抗麻疹病毒一ＩｇＭ（抗　ＭＶ—ＩｇＭ）试剂盒特异性鉴定的抗甲型肝炎病毒　一ＩｇＭ、抗ＣＭＶ—ＩｇＭ、抗ＥＢＶ—ＩｇＭ阳性血清各６份　及ＲＦ阳性血清１０份，替代抗ＭＶ．ＩｇＭ阳性标本，　以鉴定其特异性。　ＩｇＭ（抗ＨＡＶ－ＩｇＭ）、抗乙型脑炎病毒一ＩｇＭ（抗　ＪＥＶ－ＩｇＭ）、抗乙型肝炎病毒核心一ＩｇＭ（抗ＨＢｃ—　ＩｇＭ）、抗巨细胞病毒一ＩｇＭ（抗ＣＭＶ－ＩｇＭ）、抗ＥＢ　病毒一ＩｇＭ（抗ＥＢＶ－ＩｇＭ）阳性血清各６份和类风湿　因子（ＲＦ）阳性血清１０份均获白本中心检验科。　１．２．３　试剂盒稳定性观察　将自制试剂盒放置　３７℃３ｄ，与４￣Ｃ保存者同时平行检测血清标本，以　观察其检测抗ＭＶ．ＩｇＭ的稳定性。　表１　自制与海泰同类试剂盒检测８例１６份血清抗ＭＶ．ＩｇＭ的结果比较　Ｔａｂｌｅ　１　ＭＶ—ＩｇＭ　ｒｅｓｕｌｔ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ　ｉｎ　１６　ｓｅｒａ　ｆｒｏｍ　６　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｅｌｆ－ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｋｉｔ　ａｎｄ　Ｈａｉｔａｉ　ｋｉｔ　为两次检测结果的均值：　Ｓ／ＣＯ值为Ｓ（样品）Ａ值／Ｊ临界｛￣（ｃｕｔｏｆｉ）。本室自制试剂的临界值＝阴性对照平均Ａ值×２．１（阴性对照平均Ａ　值＜Ｏ．Ｏ５时，按Ｏ．０５计算）。海泰公司试剂的临界值＝阴性对照半均Ａ值ｘ２．１（阴性对照平均Ａ值＜Ｏ．Ｏ７时，按Ｏ．０７计算）。　Ａｖｅｒａｇｅ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ；　Ｓ／ＣＯ　ｖａｌｕｅ　ｗａｓ　Ｓ（ｓａｍｐｌｅ）Ａ　ｖａｌｕｅ／ｃｕｔｏｆｆ　ｖａｌｕｅ．Ｔｈｅ　ｃｕｔｏｆｆ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｓｅｌｆ－ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｒｅａｇｅｎｔ＝ｍｅａｎ　Ａ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｘ２．１（ｗｈｅｎ　ｍｅａｎ　Ａ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（（】．０５．ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｓ　Ｏ　０５）．Ｔｈｅ　ｃｕｔｏｆｆ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　Ｈａｉｔａｉ　ｒｅａｇｅｎｔ＝ｍｅａｎ　Ａ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌｘ２．１　ｆｗｈｅｎ　ｍｅａｎ　Ａ　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ＜Ｏ．０７．ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｓ　Ｏ　０７）．　维普资讯 http://www.cqvip.com

・２８０・　世界感染杂志２００７年第７卷第４期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎＶｏｌｕｍｅ　７，Ｎｕｍｂｅｒ４，Ａｕｇ　２００７　２结果　限公司生产的同类试剂盒，对本室２００６年收集的临　床疑似麻疹病例血清标本进行了平行检测。在受检　的３９例５６份血清标本中，结果一致的有８５．７％　（４８／５６），其中阳性和阴性分别为５３．６％（３０／５６）　，１３３２．１％（１８／５６）；不一致的有ｌ４．３％（８／５６）。这　２．１试剂盒的特异性　自制捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—　ＩｇＭ试剂盒仅能与抗ＭＶ—ＩｇＭ阳性血清发生反应，　而与抗ＨＡＶ—ＩｇＭ、抗ＨＢｃ—ＩｇＭ、抗ＣＭＶ．ＩｇＭ和抗　ＥＢＶ—ＩｇＭ阳性血清及ＲＦ阳性血清标本无交叉反应。　２．２试剂盒的稳定性　自制试剂盒置３７℃３ｄ进行　不一致的８份血清分属８例疑似麻疹病人，其中６份为　双份血清的首份，自制试剂盒为阳性，海泰公司试　稳定性考核后，与放置４￣Ｃ的该试剂盒平行检测临　床标本，结果一致。　２．３　自制试剂盒与同类商品检测抗ＭＶ—ＩｇＭ的比　较　以自制捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ诊断试剂盒与　海泰公司生产的同类试剂盒，对本中心２００６年收集　的３９例疑似麻疹病例的５６份血清进行了平行检测，　其中，两种试剂盒检测结果一致的血清４８份（３０　份阳性；ｌ８份阴性），有８例病人的８份血清检测　结果不一致，这些病例共有血清ｌ６份，其检测数据　见表１。　３讨论　尽管麻疹活疫苗问世和应用已长达数十年，但　近年来，仍不时发生麻疹的局部流行。为实现更好　地控制和最终消灭麻疹这一目标，特异、敏感和快　捷的临床实验室诊断和流行病学监测系统是必不可　少的。国外学者【７　】采用ＲＴ—ＰＣＲ、病毒分离和ＩｇＭ　ＥＬＩＳＡ进行了研究和比较，其结论是，血清学方法　就足以能满足实验室诊断麻疹病毒感染的需要。抗　ＭＶ　ＩｇＭ检测试剂盒能用单份血清诊断９５％的病例　【８】。捕获法ＥＬＩＳＡ检测麻疹病人出疹后４—１　ｌｄ采集　的血清，其特异性ＩｇＭ可呈１００％￣Ｈ性　Ｊ。因此，　抗ＭＶ—ＩｇＭ检测己成为实验室确认麻疹感染的标准　诊断方法之　。　由于间接法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ试剂盒往往有假　阳性和假阴性结果出现【ｍ】，而捕获法ＥＬＩＳＡ抗　ＭＶ．ＩｇＭ试剂盒则很少出现这种情况。为获得更理　想的抗ＭＶ—ＩｇＭ检测诊断试剂，我们自行研制了抗　ＭＶ单克隆抗体及其酶结合物，并在此基础上制备　了捕获法ＥＬＩＳＡ的抗ＭＶ—ＩｇＭ检测诊断试剂盒。经　考核，该试剂盒仅与抗ＭＶ—ＩｇＭ阳性的临床麻疹病　人血清发生反应。而与抗ＭＶ—ＩｇＭ阳性、抗ＨＡＶ　ＩｇＭ、抗ＨＢｃ—ＩｇＭ、抗ＣＭＶ—ＩｇＭ、抗ＥＢＶ—ＩｇＭ和　抗ＪＥＶ．ＩｇＭ阳性以及ＲＦ阳性的血清均未发现有非　特异的交叉反应。该试剂盒在３７℃放置３ｄ后，与　其在４￣Ｃ保存者平行检测血清抗ＭＶ—ＩｇＭ的结果一　致，证明该试剂盒具有良好的特异性和稳定性。　为评价本室研制的诊断试剂盒用于检测血清　抗ＭＶ—ＩｇＭ的相对敏感性，与珠海海泰生物制品有　剂盒为阴性，但他们的第二份血清两种试剂盒均为　阳性：另ｌ份血清自制试剂盒检测为临界值，海泰试　剂盒为阴性，因该病例缺乏第二份血清，难以做出　最后判定；再有ｌ份血清是ｌ例采集到三份血清病人　的第二份，自制试剂盒阳性，海泰试剂盒阴性，两　种试剂盒检测其首份血清均阴性，第三份血清均阳　性。这些结果证明自制试剂盒可以使抗ＭＶ—ＩｇＭ阳　性结果的检出相对提前，其敏感性也是良好的。　本文表明，本室自行研制的抗ＭＶ—ＩｇＭ单克隆　抗体，和在此基础上制备的捕获法ＥＬＩＳＡ抗ＭＶ—ＩｇＭ　诊断试剂盒性能良好，有利于临床诊断和流行病学　监测，更好地控制麻疹病毒的传播。　参考文献：　［１］　Ｗｏｒｌｄ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ．ＷＨＯ—ＵＮＩＣＥＦ　ｊｏｉｎｔ　ｓｔａｔｅｍｅｎｔ　ｏｎ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｔｏ　ｒｅｄｕｃｅ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｍｏｒｔａｌｉｔｙ　ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ［Ｊ］．Ｗｋｌｙ　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ　Ｒｅｃ，２００２，７７：２２４—２２８．　［２】Ｄｅ　Ｑｕａｄｒｏｓ　ＣＡ，Ｉｚｕｒｉｅｔａ　Ｈ，Ｃａｒｒａｓｃｏ　ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｔｏｗａｒｄ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｅｒａｄｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，　２００３，１８７（Ｓｕｐｐｌ　１）：１０２・ｌ１Ｏ．　［３］　中华人民共和国国家标准《麻疹诊断标准及处理原则》（ＧＢ　ｌ５９８３一ｌ９９５）　［４Ｊ　Ｆｅａｔｈｅｒｓｔｏｎｅ　Ｄ，Ｂｒｏｗｎ　Ｄ，Ｓａｎｄｅｒｓ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｌｏｂａｌ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｎｅｔｗｏｒｋ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２００３，ｌ　８７（Ｓｕｐｐｌ　ｌ１：２６４—２６９．　［５］　Ｅｒｄｍａｎ　ＤＤ，Ｈｅａｔｈ　ＪＬ，Ｗａｔｓｏｎ　ＪＣ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｍ　ａｎｔｉｂｏ—　ｄｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔＯ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｖｉｒｕｓ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｐｒｉｍａｒｙ　ａｎｄ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ　ｖａｃｃｉ－　ｎａｔｉｏｎａｎｄ　ｎａｔｕｒａｌ　ｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＭｅｄＶｉｒｏｌ，ｌ９９３，４ｌ（１）：４４＿４　８．　［６］　Ｒａｔｎａｍ　Ｓ，Ｔｉｐｐｌｅｓ　Ｇ　Ｈｅａｄ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎｄｉｒｅｃｔ　ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ　Ｍ（ＩｇＭ）ｓｅｒｏｌｏｇｙ　ｔｅｓｔｓ　ａｎｄ　ＩｇＭ　ｃａｐｔｕｒｅ　ａｓｓａｙｓ　ｆｏｒ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，３８（１）：　９９－ｌｏ４．　［７］　Ｓｔｅｗｉｅｎ１　ＫＥ，Ｌｉｍａ　ＬＲＡＶ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｎｄ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓｌｉｋｅ　ｒａｓｈ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ａｎｄ　ｙｏｕｎｇ　ａｄｕｌｔｓ［Ｊ］．Ｂｒａ　Ｊ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　２０００，３１：２８１．２８５．　［８］　ｌＭｕｂａｒａｋＨＳ，ＶａｎＤｅＢｉｌｄｔＭＷ，ＭｕｓｔａｆａＯＡ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｅｄ　ｃａｓｅｓ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｉｎ　ｓｕｂｕｒｂａｎ　Ｋｈａｒｔｏｕｍ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，３８（３）：９８７－９９１．　（以下转第２８７页）　维普资讯 http://www.cqvip.com

兰　查鲞窒查２００７年第７卷第４期Ｗｏｒｌｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＩｎｆｅｃｔｉｏｎ　Ｖｏｌｕｍｅ　７，Ｎｕｍｂｅｒ　４，Ａｕｇ　２００７　表３　ＨＢｅＡｂ＋￣ＨＢｅＡｂ一乙型肝炎肝硬化病人肝功能指标和基因变异及ＨＢＶ　ＤＮＡ定量的比较　Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｌｉｖｅｒ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃｅｓ，ｇｅｎｅ　ｍｕｔａｔｉｏｎ．ａｎｄ　ＨＢＶ　ＤＮＡ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ＨＢｅＡｂ＋ａｎｄ　ＨＢｅＡｂ—ｃｉｒｒｈｏｓｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　３讨论　ＣＰ双变异优势株慢性乙肝病例有必要用干扰素抗　病毒治疗　。另外，本研究中ＨＢｅＡｂ阳性ＬＣ组的　前Ｃ终止变异的发生率显著高于ＨＢｅＡｂ阴性ＬＣ　组（７５．０％ＶＳ　５．６％）；而ＣＰ双变异则在两组ＬＣ中　无明显差异（７５．０％ＶＳ　７７．８％）。提示前Ｃ终止变异　则与肝硬化病人的ＨＢｅＡｇ／ＨＢｅＡｂ转换有关。　参考文献：　［１】　Ｃａｒｍａｎ　ＷＦ，Ｊａｃｙｎａ，Ｈａｄｚｉｙａｎｎｉｓ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｅ　ａｎｔｉｇｅｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　检测ＨＢＶ基因变异最直接，最准确的方法是　基因序列分析。ＨＢｅＡｇ定量则以Ａｂｂｏｔｔ公司　ＡｘＳＹＭ全自动免疫定量分析仪及其配套的试剂检　测最为准确可靠。采用荧光定量ＰＣＲ技术，依据　ＴａｑＭａｎ原理对模板ＤＮＡ进行实时在线定量检测，　也是目前最常用的ＨＢＶ　ＤＮＡ定量方法。　ＨＢｅＡｇ由前Ｃ／Ｃ基冈表达。同时，ＨＢｅＡｇ的　表达受ＣＰ。前Ｃ终止变异和ＣＰ双变异均使　ＨＢｅＡｇ表达受阻。本研究叶ｌ，ＣＰ双变异虽使ＨＢｅＡｇ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ】．Ｌａｎｃｅｔ，１９８９，ｉｉ：５８８—５９０　【２】　Ｓｃａｇｌｉｏｎｉ　ＰＰ，Ｍｅｌｅｇａｒｉ　Ｍ，Ｗａｎｄｓ　ＪＲ，ｅｔ　ａ１．Ｂｉｏｌｏｇｉｃ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒａｌ　ｇｅｎｏｍｅｓ　ｗｉｔｈ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｃｏｒｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ａｎｄ　表达显著下降，但幅度较小；与对照组相比，ＣＰ　双变异组的ＨＢｅＡｂ阳性率也无明显升高；前Ｃ终　止变异则大幅度影响ＨＢｅＡｇ表达，显著增高　ＨＢｅＡｇ／ＨＢｅＡｂ转换率。表明ＣＰ双变异仅是下调　ＨＢｅＡｇ的表达，而前Ｃ终止变异则能终止ＨＢｅＡｇ　的表达。这与其它报道相一致Ｉ１　］，另外，本研究结　果还表明终止变异联合双变异组的ＨＢｅＡｇ含量、　ＨＢｅＡｂ阳性率同终止变异组相近。　ｐｒｅｃｏｒｅ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｌａｍｅ［Ｊ】．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９７，２３３：３７４—３８１．　［３】　沈雁冰，谢迎春．湖北地区乙型肝炎病毒基因分布的临床意义　【Ｊ】．世界感染杂志，２００６，６（４）：３２４．３２５．　［４】　陈晓蓉，姚华，杨婉风，等．前Ｃ区１８９６变异与慢性乙型肝炎重　型肝炎相关性探讨【Ｊ１．世界感染杂志，２００４，４（１）：２８．３０．　［５】　周飞，王灵台，陈建杰，等．乙型肝炎病毒前Ｃ区基凶变异与中　医证型的关系［Ｊ１．Ｉ廿界感染杂志，２００３，３（４）：２８６—２８８．　［６】　张汉荣，刘新钰，孙梅，等．乙肝病毒Ｃ基因启动子和前Ｃ／Ｃ基　值得关注的是，本研究中乙型肝炎肝硬化病人　的ＣＰ双变异的发生率显著高于慢性乙肝；血清　ＨＢｅＡｇ含量显著低于慢性乙肝；ＣＰ双变异组ＨＢＶ　因变异与乙肝病毒携带者肝炎发作及慢性乙肝病情严重性的关　系【ＪＪ．江苏医药，２００１，２７（１２）：８８５．８８７．　ＤＮＡ定量仍为高滴度（见表２）。我们另两项研究　发现，ＣＰ双变异优势株更多的是在病程较长病情相　【７】　张汉荣，刘新钰，孙梅，等．乙型肝炎病毒Ｃ基因启动子和前Ｃ　基因变异与ＨＢｅＡｇ含量和肝炎病情的临床研究［Ｊ１．临床肝胆病　杂志，２００３，１９（５）：２９０．２９１．　【８】　Ｙｏｔｓｕｙａｎａｇｉ　Ｈ，Ｈｉｎｏ　Ｋ，Ｔｏｍｉｔａ　Ｅ．ｅｔ　ａｌ　Ｐｒｅｃｏｒｅ　ａｎｄ　ｃｏｒｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　对较重（慢性乙肝中度和重度）的病例中出现，并　持续存在＿ｏ一』。均提示ＣＰ双变异与乙型肝炎肝硬化　发病机制有关。因为，ＨＢｅＡｇ作为免疫耐受因子，　ＣＰ双变异使其表达下降，免疫耐受被打破；且该优　势株持续存在，ＨＢＶ持续高复制，使机体免疫功能　持续紊乱，从而造成肝硬化发生。晚近，Ｙｏｔｓｕｙａｎａｇｉ　Ｈ也报道ＣＰ双变异与乙型肝炎肝硬化发生有关　］。　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ，ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ＤＮＡ　ｌｅｖｅｌｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ　ｌｉｖｅｒ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ【ＪＪ．Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，２００２，３７（３）：３５５．３６３．　［９】　张汉荣，刘新钰，钟备，等．乙型肝炎病毒Ｃ基因启动子区域　Ｔ１７６２　ＡＩ　７６４变异的临床及干扰素应答案［Ｊ１．海南医学，２００１，　１　２（１０）：８】．８３．　（上接第２８０页）　［９］　Ｅｌｆａｎｄ　ＲＦ，Ｈｅａｔｈ儿，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　ＬＪ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ　ＩｇＭ　ｃａｐｔｕｒｅ　ＥＩＡ：ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｉｍｉｎｇ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｍｅｎ　ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｒａｓｈ　ｏｎｓｅｔ．【Ｊ】＿Ｊ　Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ，１９９７，１７５：１９５—１９９　［１０］Ｂｅｌｌｉｎｉ　Ｗ　Ｊ，Ｈｅｌｆａｎｄ　Ｒ　Ｆ，Ｔｈｅ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ　ａｎｄ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｍｅａｓｌｅｓ　ｉｎ　ａｎ　ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｓｅｔｔｉｎｇ【Ｊ】Ｊ　．Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓ，２００３，１８７（１）：２８３—２９０．