检测分析
DOI：10.12161/j.issn.1005-6521.2020.19.030
云oodResearchAndDevelopment食品研究与开发圆园20年10月
第41卷第19期
173腺苷和HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、
麦角甾醇的含量
孙志双，姜小天，施溯筠*
（延边大学药学院，吉林延吉133002）
摘要：建立一种利用高效液相色谱法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法，并对沈阳、广东、江苏结果表明，3个产地的蛹虫草进行测定结果的比较。虫草素、腺苷和麦角甾醇分别在5滋g/mL~65滋g/mL、5滋g/mL~35滋g/mL和25滋g/mL~300滋g/mL范围内线性关系良好，江苏的虫草素含量最高，为1.3mg/g，广东的含量最低，为虫草素和麦角甾醇的含量0.5mg/g，广东的腺苷和麦角甾醇含量最高分别为1.9、5.8mg/g。不同产地蛹虫草中的腺苷、差异较大；该方法准确性高，重复性好，适用于蛹虫草中腺苷、虫草素和麦角甾醇的含量测定，为其质量评价提供参考。关键词：高效液相色谱法；蛹虫草；虫草素；腺苷；麦角甾醇
DeterminationofCordycepin，AdenosineandErgosterolinCordycepsmilitarisbyHPLC
（CollegeofPharmacy，YanbianUniversity，Yanji133002，Jilin，China）
SUNZhi-shuang，JIANGXiao-tian，SHISu-yun*
粤遭泽贼则葬糟贼：Amethodforsimultaneousdeterminationofcordycepin，adenosineandergosterolinCordycepsmilitarisbyhighperformanceliquidchromatographytocomparethecontentsofCordycepsmilitarisfromShenyang，GuangdongandJiangsuprovinceswasestablished.Theresultsshowedthatcordycepin，adenosine25滋g/mL-300滋g/mL，respectively.ThehighestcontentofcordycepininCordycepsmilitariswas1.3mg/gfromJiangsu，andthelowestwas0.5mg/gfromGuangdong.ThehighestcontentofadenosineandergosterolwasfromadenosineandergosterolinCordycepsmilitarisfromdifferentareas；themethodhadhighaccuracyandgoodrepeatabilityandcouldbeusedtodeterminetheminCordycepsmilitaris，andtoprovidethereferenceforthequalityevaluationofCordycepsmilitaris.ergosterol
andergosterolhadagoodlinearrelationshipintherangeof5滋g/mL-65滋g/mL，5滋g/mL-35滋g/mLandGuangdongandthecontentwas1.9mg/gand5.8mg/g.Therewasdifferenceamongthecontentsofcordycepin，
运藻赠憎燥则凿泽：highperformanceliquidchromatography（HPLC）；cordycepsmilitaris；cordycepin；adenosine；
引文格式：
腺苷和麦角甾醇的含量[J].食品研究与开发，孙志双，姜小天，施溯筠.HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、2020，41（19）：173-176
SUNZhishuang，JIANGXiaotian，SHISuyun.Determinationof
tarisbyHPLC[J].FoodResearchandDevelopment，2020，41（19）：173-176
Cordycepin，AdenosineandErgosterolinCordycepsmili原
（Cordycepsmilitaris）蛹虫草又名北冬虫夏草[1]，它（Ophiocordycepssinensis）与珍贵的中药材冬虫夏草属于同属异种的真菌界植物，是药用及食用价值很高的
（1994—）作者简介：孙志双，女（汉），硕士研究生，研究方向：天然生物资源的开发与活性成分研究。
（1972—）*通信作者：施溯筠，女（汉），副教授，博士，研究方向：天然生物资源的开发与活性成分研究。
虫草素、核苷类、甾虫菌复合体。蛹虫草含有虫草多糖、
醇[2]类等多种营养成分。研究表明，蛹虫草可以增强人体的免疫功能[3]；抑制肿瘤组织的生长[4]；抑制神经系降血糖[5-6]等多种重要的生物统、改善心脑血液循环、学活性。具有很高的药用价值和食用价值，它的药效是各活性成分共同发挥作用的结果，且其疗效与其质量密切相关，因此建立准确的质量标准十分重要，本文在众
孙志双，等：HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量
检测分析
174多活性成分中选择了虫草素、
腺苷和麦角甾醇进行同时测定，可以用于比较不同产地被测物的含量差异，并根据不同成分的含量进行选择，为全面客观地认识蛹虫草药材功效物质基础、
丰富和发展蛹虫草药材多指标评价体系研究和蛹虫草的质量评价提供参考。
张铭雅等[7]建立色谱法-串联质谱方法同时对蛹虫草中虫草素、虫草酸、腺苷和肌苷的含量进行测定；常衬心等[8]建立了一种虫草麦角留醇含量检测及质量控制方法；林宏琳等[9]建立高效液相色谱-二极管阵列检测presence器（highperformanceliquid软胶囊中detect还原，型HPLC-SPD和氧化型谷）法胱同时chromatography-serial甘肽测的定含量九苷，肽但蛹虫目前草
没有同时测定蛹虫草中虫草素、
腺苷和麦角甾醇的相关文献。此外，高效液相同时测定法的应用十分广泛，可应用在环境保护学、植物生态学、食品科学等方面，且结果准确可靠，可用于多种领域中物质的定量分析，具有较大的实际应用价值。11.1
材料与方法
虫材料草素与标准仪器
品（20161123）、腺苷标准品（1129A023）：
索莱宝科技有限公司；角甾醇标准品（J26M6K1）：上海源叶生物科技有限公司；超纯水：延边大学药学院实验室；色谱甲醇（709292）：格瑞斯化工科技有限公司。其余试剂均为分析纯。蛹虫草：延吉市东市场，经延边大学药学院施溯筠副教授限公司DHG-9145A；UNIQUE-R20型电热超鼓鉴纯水机风定为干燥蛹虫：箱厦：草门常。
锐州思诺基捷仪水纯器有
化技术有限公司；ISO-9001电子天平：上海良平仪器仪表有限公司；KQ5200E超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；80-2型离心沉淀器：上海耀特仪器科技有限公司；HitachiPrimaide高效液相色谱仪：天美（中1.2
国）科学仪1.2.1试验色色谱柱谱方器有限公司。
条件
法
为DiamosilC动相为甲醇-水梯度洗脱，18（4.6mm伊250mm，5滋m），流
20min，20%~100%甲醇；0~1520min~45min，20min%甲醇，100；15%甲醇min~体积流量1.0mL/min，柱温30益，进样量10滋L，检测。
波长260nm。1.2.2.1
1.2.2溶液的配制
3.0mg精，密混分称合标准别取置虫于草品10素溶mL1.54液
量瓶mg中，、腺加苷甲醇1.3mg溶解、麦并角定甾容醇
，
制成单一标准品贮备液。分别精密量取适量上述单一标准43.33品滋贮g、备液麦，制成每1mL含虫草素51.33滋g、腺苷1.2.2.2供试角品甾溶醇液
100滋g的混合标准品溶液。
取蛹虫草适量，烘干，粉碎过60目筛。精密称取
蛹虫草粉末0.5g，加入25mL甲醇超声溶解，过滤，滤渣弃去，待滤液冷却至室温（23依2）益后离心5min（5000r/min），取上清液过0.45滋m微孔滤膜，得供试1.2.3品溶液。
按系统1.2.1适应项下性色试验
谱条件，精密吸取上述混合对照品
溶performance液、供试品溶液各10滋（high1.2.4
liquidchromatographyL注入，HPLC高效液）仪相中，色谱测定。标准线性曲线关系浓考度察
：取1.2.2.1项下单一标准品贮备液
梯65度稀释配制成虫草素浓度为5、15、25、35、45、麦角滋g/mL甾醇，25腺、苷50、浓100度、为1505、、10200、15、250、20、、30025、滋30g/mL、35滋的g/mL55、系列，标准溶液，按1.2.1项下色谱条件进行测定，记录峰面积。分别以虫草素、腺苷和麦角甾醇标准品浓度为横1.2.5坐标，以精色密度谱峰试验
面积为纵坐标，绘制得到标准曲线。
取1.2.2.1项下的混合对照品溶液，按1.2.1项下1.2.6色谱条件按重1.2.2.2复连续测性试验定6次，记录峰面积。
项下方法制备供试品溶液，平行6份，1.2.7
按1.2.1稳定项下性色试验
谱条件进行测定，计算含量。
取同一批蛹虫草药材，按1.2.2.2项下方法制备溶
液，分别于0、2、4、8、10h进样，测定此批蛹虫草中虫1.2.8
草素、腺加苷样和回收麦角率甾试验
醇的峰面积。
3份为精一密组称，取已分别知精含量密加的入同低、一批中样、高质量品适量的，共对9照份品，每量，按“1.2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“1.2.1适
”1.2.9
项下色谱含量条件进测定
样测定并计算加样回收率。
取不同产地蛹虫草药材，按1.2.2.2项下方法制备供试品溶液，并按1.2.1项下色谱条件进行测定，采用标准曲线法计算含量（平行测定3组，取平均值）。2
2.1结果与分析
混系统合标准适应品性和试验
供试品高效液相色谱图见图1和图2。
检测分析
孙志双，等：HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量
10080604000
510152025303540455055
保留时间/min
图1.1腺苷混合；2.标准虫草品素高；3.效麦液角相甾色醇谱。
图
Fig.1HPLCchromatogramsofmixedstandards
4030201000
510152025303540455055
保留时间/min
1.图腺2苷；供2.试虫品草高素效；3.液麦相角色甾谱醇图。Fig.2HPLCchromatogramsofsample
结果如图1和图2，供试品溶液色谱图中，虫草素、腺苷和麦角甾醇的保留时间与相应标准品溶液色谱2.2图一致，且其分离度均大于利用线性关1.5。HPLC系考在察
1.2.1项色谱条件下对1.2.2.1项下
单一标准品贮备液进行测定，以峰面积（Y）对各物质浓度（X）进行线性回归，得虫草素、腺苷和麦角甾醇的
回36归227方X程-分42别375为（YR=52187X-135932（R22=0.9992）、Y=9340.8=0.999）、RY2==
50.999滋g/mL~654）。结果滋g/mL表明、，5虫滋草g/mL~35素、腺苷滋和麦角X-甾29醇987分（别在300g/mL、25滋g/mL~2.3滋对样精g/mL密度线品进行试验
性关系良好。精密度试验，结果虫草素、腺苷和麦ation角甾醇峰面积的相对标准偏差（relativestandarddevi原
密度，RSD）分别为0.97%、1.35%、1.20%，表明仪器精2.4良对样重好复，品性符进行试验
合试验要求。重复性试验，结果蛹虫草中虫草素、
腺苷和麦角甾醇峰面积的RSD分别为0.98%、1.86%、
1752.5
1.69%稳定，表明性方试验
法的重复性良好，符合试验要求。
对样品进行稳定性试验，测定此批蛹虫草中虫草素1.18、腺苷和麦角甾醇的峰角%、1.36%，表明供试面品积，计算RSD分别为腺0.88苷和%麦、2.6
甾醇在10h溶液中虫草素、对样加样品回收内稳定。
进行率加试验
样回收率试验，试验结果如表1。
表13种成分加样回收试验
Table1Recoverytestsforthreekindsofingredients
项目样品滋含量g/加入量/测得量/回收率/平均回
虫草素
612.936滋g29.163滋g497.78%收率/%RSD/%
16.51498.
1.36
16.13016.525912.93628.92316.1612.93629.6316.206716.17032.2196101.43
98.16.356916.17032.113999.2916.13716.17032.430398.3716.5393
19.40419.40435.2099.4119.40435.4096.9612.4835.694697.25腺苷
16.60115.5843927.6708698.4096.8498.58
1.35
15.13215.367212.4812.4827.33515.6027.740197.7815.637015.6031.3915.6030.6735101.0399.15
15.358815.530718.7231.048298.1715.373915.861818.7233.886299.4718.7234.3960698.麦角甾醇15.971991.37559
72162.69934.1000
99.01196.8499.0699.11
2.
90.43592.5661
7272
160.83690.412790163.393797.72.581490179.8271498.3799.3593.7839100180.003182.7619100.02
90.299994.5817108193.7639795.8096.7493.95790108200.736199.06161105.86
98.872.7
取含量不同测产地的定
蛹虫草药材进行含量测定，结果如
表2。
表2样品含量测定
Table2Samplecontentdetermination
含量测定虫草素（/mg/g）
腺苷（/mg/g）
麦角甾醇（/mg/g）
沈阳0.820.784.广东0.51.95.8江苏
1.3
1.4
3.9
孙志双，等：HPLC法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量
检测分析
3讨论与结论
176纪晓朋[10]、任玉合等[11]和李怡霖[12]分别研究了光照度、光照时间、有色光照对蛹虫草的生长发育、活性成分、产量的影响，试验证明不同光源、光强、照射时间对其含量有所影响。李居宁等[13]研究表明蛹虫草菌丝及子实体生长对温度十分敏感，为提高其产量与质量可以实行变温管理。闫丽丽[14]阐述了培养基成分、培养介质、不同发育程度及外源物质添加等因素对蛹虫草生长发育、活性成分及产量的影响。
综上，虽然目前蛹虫草已经可以进行人工栽培，但子实体产量和品质与天然的蛹虫草在一定程度上有较大差别，其不同成分的含量也不同。本试验对3个不同产地蛹虫草中的虫草素、
腺苷和麦角甾醇进行测定，3种蛹虫草样品中测得的含量各不相同，可能是样品的来源、生长环境等不同造成了一定差异。可以根据不同需求选择不同产地的蛹虫草进行使用：若想用于增强人体的免疫功能、减少病毒的传播、杀灭病菌等作用可以选择江苏省的蛹虫草，其虫草素含量较高；若用于改善心脑血液循环、抑制神经系统、抗辐射、抗癌、减毒可以选择广东省的蛹虫草，其腺苷和麦角甾醇的含量较高。
200nm~400作者曾取nm“1.2.2.1波长范”围项内下单进行一扫描对照，品结果贮备液虫草分素别在在
最260大nm吸收波，长麦处角有甾最醇大在吸282收，nm腺波苷长在处262有最nm大波吸长收处，在有
宜260的nm灵敏处度也并减有较少大的干扰吸，收最，终为本研究在保证各指260标成分均有nm处同时适
测定3种成分。甘宾宾等[15]表明甲醇-水提取体系比乙醇-水体系提取率更高，但在试验中发现，甲醇-水体积比7颐3提取时麦角甾醇未出峰，查阅江莉等[16]
文献，选用甲醇对麦角甾醇进行提取，因此最终选用100%甲醇提取蛹虫草。等度洗脱操作简单但不能同时测定多种目标成分，选用甲醇和水梯度洗脱可以使目标成分之间的色谱峰分离度良好，同时进行多成分的有效测定，可通过同时测定3种成分的含量，为品质优良的药材筛选提供鉴定基础。
本文建立了高效液相法同时测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇含量的方法，该方法有分离度好、准确性高，重复性好，结果稳定可靠等优点，且目标峰
保留时间适中，可以快速、有效的测定蛹虫草中虫草素、腺苷和麦角甾醇的含量，具有良好的实用性，可作为蛹虫草的质量控制方法。参考文献：
[1]
左其锦应辉用,研究贡晓燕进展,[J].董银食卯品科学,等.蛹虫,2018,草的39(21):活性成分和330-339药理作用及[2]刘工艺春研究宇,朱[J].振食元品研究,孙会轻与,开发等.蛹虫,2018,草、39(24):山楂提77-82
取物固体饮料制备[3]
KwonmilitarisHfermentedK,JoWR,withParkPediococcusHJ.Immunepentosaceus-enhancing(GRC-ONA)activityofC.
inCY-induced[4]王Alternative征,武雪,Medicine,immunosuppressedmodel[J].BMCComplementaryand刘建利,等2018,.虫草18(1):75学杂志,2015,50(16):1365-1368
素抗肿瘤活性研究进展[J].中国药[5]万上海中朋,高医俊药涛杂志,吕世,2015,杰.蛹虫49(6):草化95-97
学成分及药理作用研究进展[J].
[6]Liutaining,F,Zhuanti-tumorCordycepsZY,Sunactivities[J].militaris,X,etal.TheInternationalpolysaccharides:preparationofJournalofCharacterizationthreeseleniumconBiologicalMac-roand原
molecules,2017,99:196-204
原[7]
张中铭虫雅草,素朱、志虫铭草酸,姚、腺迪苷,等和.肌HILIC-MS/MS苷含量的方法技学术[J].同时生物加工检测蛹虫过程草,
[8]常2019,衬心17(4):.虫草430-436南大学,2017
麦角甾醇及其合成途经相关基因分析[D].昆明:云[9]
林中宏还琳原,型杨及艳氧,童化型谷金华胱.HPLC甘肽含量法同时[J].测药定物九分苷析杂志肽蛹虫,2017,草软37(6):胶囊[10]1001-1005
纪技大学晓朋.,蛹虫2014
草生长发育的光质效应研究[D].榆林:西北农林科
[11]任响玉[J].合农业,王与殿技振术,贺,2016,晓龙,36(7):等.光37-38,照时间73对北虫草生殖生长的影
[12]业大学李怡霖,.2018
蛹虫草的生长生理与光的相关性研究[D].长春:吉林农[13]李北农业科学居宁,方华,舟2016,.温度对55(2):蛹虫385-3草菌丝及子实体生长的影响[J].湖
[14]2019(3):闫丽丽.影响66-68
蛹虫草生长发育及产量的因素[J].农业科技与装备,[15]甘中国宾宾卫,生潘检艳验坤杂志.HPLC,2006(11):法测定保1310-1311健食品中虫草素和腺苷含量[J].
[16]学江,莉2019,,乐占线31(3):66-68
.虫草花中麦角甾醇的提取和含量测定[J].海峡药
收稿日期：2019-09-09
